단백질의 정색반응(닌히드린, 브래드포드 반응)

실험기구 및 재료

 

0.1% 닌히드린 용액, 브래드포드 시약(Coomassie G250), 1% 알부민 용액, 1% 수크로오스 용액, 1% 말토오스 용액, 1% 글리신 용액, 1% 글루코오스 용액, 1% 카세인 용액

비등수조, 플로터, 튜브, 마이크로피펫, 피펫용 벌브

 

 

 

1. 닌히드린 반응(ninhydrin reaction)

 

 

1. 각각의 시험관에 1%로 희석된 알부민, 수크로오스, 말토오스, 글리신, 글루코오스, 카세인을 각각 0.5ml씩 넣는다.

2. 0.1 % 닌히드린 용액을 각 시험관에 0.5ml씩 첨가한다.

 

3. 3분간 끓는 물에 중탕시킨 후 냉각 후 관찰한다.

 

 

 

 

2. 브래드포드 반응(Bradford assay)

 

 

 

         Comassie dye ligand가 단백질의 positive charge를 띈 부분(arginine, lysine, histidine 잔기)에 결합하여, 붉은색(466nm에서 흡광)이던 dye는 푸른색(595nm에서 흡광)으로 스펙트럼 이동이 일어나는 것을 이용하는 방법

 

 

1. 각각의 시험관에 1%로 희석된 알부민, 수크로오스, 말토오스, 글리신, 글루코오스, 카세인을 각각 0.5ml씩 넣는다.

2. Bradford 용액을 각 시험관에 0.2ml씩 첨가한다.

 

 

*Bradford 에 대해서는 발색만 관찰 (열가열X)

 

 

 

※실험시 주의사항

 

 - 닌히드린 용액은 매우 민감하게 반응하므로 피부에 묻지 않도록 주의한다.

 - 마이크로피펫을 사용할 때 피펫 내부로 시약이 들어가지 않도록 조심스럽게 사용한다.